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乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5在酵母細胞中的表達

【?2008-06-03 發布?】 臨床報道  

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    該項研究目的是在真核生物酵母細胞中表達乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)。方法采用以HepG2細胞來源的mRNA為模板,經RT-PCR法擴增PS1TP5基因,克隆到pGEM-T載體中,并測序鑒定,酶切回收后連接到酵母表達質粒pGBKT7中,并轉化酵母AH109,色氨酸缺陷型培養基(SD/-Trp)上篩選陽性菌落,提取酵母蛋白質,進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS―PAGE)和Western免疫印跡分析,以明確PS1TP5是否可在其中表達。結果成功擴增出PS1TP5,測序鑒定符合基因庫報告序列,酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆人酵母表達載體pGBKT7,并轉化人酵母細胞AH109中,Western免疫印跡顯示該基因在酵母細胞中成功表達,表達產物相對分子質量為36950。由此得出結論成功構建了PS1TP5酵母表達載體,并在酵母細胞中表達。/**/
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