西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院
田應(yīng)選 楊拴盈 南巖東 張 濰 周 斌 卜麗娜 霍樹(shù)芬

浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二醫(yī)院腫瘤研究所 余捷凱 鄭 樹(shù)

肺鱗癌和腺癌是肺癌的主要組織類(lèi)型；應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法比對(duì)兩種腫瘤的差異蛋白是闡明其癌變機(jī)制、篩選分型和診斷標(biāo)志的有效手段。但腫瘤組織的異質(zhì)性是蛋白組學(xué)研究面臨的主要問(wèn)題。激光捕獲顯微切割（LCM）技術(shù)是解決腫瘤組織異質(zhì)性問(wèn)題的有效方法。其聯(lián)合表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜（SELDI-TOF-MS）蛋白質(zhì)芯片技術(shù)可以從微量樣品中篩選差異蛋白。

我們應(yīng)用LCM聯(lián)合SELDI-TOF-MS 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)及支持向量機(jī)（SVM）方法進(jìn)行肺腺癌和鱗癌差異蛋白組研究的可行性。將6 例新鮮肺腺癌及7 例肺鱗癌組織標(biāo)本制備8um 厚度冰凍切片；改良HE 染色；用LCM選擇性獲取1.2×105/個(gè)同質(zhì)腺癌細(xì)胞和1.45×105/個(gè)鱗癌細(xì)胞。經(jīng)過(guò)PBS II＋型SELDI-TOF-MS 分析儀（IMAC 芯片）分析腺癌及鱗癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜并對(duì)比差異點(diǎn)；應(yīng)用ZUCI-ProteinChip DataAnalyze System 軟件包篩選并驗(yàn)證候選的標(biāo)志蛋白的判別效能。

結(jié)果表明在比較鱗癌和腺癌細(xì)胞間的SELDI 譜圖，共篩選出87 個(gè)差異蛋白峰。將差異最明顯的10 個(gè)蛋白峰作為潛在的候選標(biāo)志蛋白。4種蛋白（分子量分別為2505 U、4004 U、4847 U、11412 U）在鱗癌中呈高表達(dá)；6 種蛋白（分子量分別為3333 U、3592 U、3848 U、5036 U、5191 U、5211 U）在鱗癌中低表達(dá)而在腺癌中呈高表達(dá)。其中4847 U 在鱗癌和腺癌中表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨機(jī)組合10 個(gè)差異蛋白，形成組合模型；用SVM 和ROC 曲線(xiàn)建立分類(lèi)預(yù)測(cè)模型并評(píng)價(jià)各模型效能；篩選出由3 個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)（分子量分別為4847 U、11412 U、3592 U）組合成的分型診斷模型。經(jīng)盲法交叉驗(yàn)證該模型可以準(zhǔn)確區(qū)分鱗癌和腺癌，其敏感度和特異度可達(dá)100%。提示LCM 聯(lián)合SELDI 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)可以篩選敏感性高、特異性強(qiáng)的肺癌標(biāo)志蛋白及分型診斷模型；該技術(shù)將為肺腺癌早期診斷研究提供新的有效工具。