（武漢）為了研究錘頭狀核酶通過(guò)調(diào)控CD95的表達(dá)，對(duì)小鼠胰島細(xì)胞凋亡的影響,探索提高胰島移植物存活率的新途徑，研究者體外構(gòu)建針對(duì)CD95 mRNA 93位點(diǎn)的錘頭狀核酶(pU6-Rz93)和突變型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型膠原酶消化法分離小鼠胰島細(xì)胞，通過(guò)干擾素-γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素1α(IL-1α)誘導(dǎo)其高表達(dá)CD95后，經(jīng)鈉米載體-Effectene將核酶轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫印跡檢測(cè)(Western blot)法檢測(cè)胰島細(xì)胞CD95的表達(dá)。胰島細(xì)胞經(jīng)抗CD95的抗體(JO2)作用后，以Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞Caspase-3活性的變化；MTT法測(cè)細(xì)胞的增殖；Annexin-Ⅴ凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡，并觀察了各組細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)殺傷的反應(yīng)能力。結(jié)果細(xì)胞因子可誘導(dǎo)小鼠胰島細(xì)胞高表達(dá)CD95分子。轉(zhuǎn)染pU6-Rz93組的胰島細(xì)胞CD95的表達(dá)與轉(zhuǎn)染空載體組和轉(zhuǎn)染pU6-dRz93組相比，明顯下降。經(jīng)JO2處理后，轉(zhuǎn)染pU6-Rz93組胰島細(xì)胞的Caspase-3活性和凋亡率明顯降低，細(xì)胞增殖活性和抵抗CTL殺傷的能力顯著增強(qiáng)。可見針對(duì)Fas mRNA 93位點(diǎn)的錘頭狀核酶能顯著抑制小鼠胰島細(xì)胞CD95的表達(dá)，使其免于CD95途徑的凋亡,為提高胰島移植物的存活率提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 /**/